Növénytermelés / 71. évfolyam / 2. szám (2022. június) / 5-20. oldal

BAKOS ZSUZSANNA – MICSINAI ADRIENN – PARÁDI ISTVÁN – NAGY JÁNOS

Különböző csemegekukorica (Zea mays L. convar Saccharata Koern) genotípusok molekuláris biológiai markereinek értékelése

Vizsgálataink során célunk a lutein bioszintézis molekuláris biológiai markereinek nyomon követése célzott génexpressziós vizsgálatokkal három csemegekukorica hibriden: Dessert R78, Messenger és Honey a növények generatív fázisában. Megállapítottuk, hogy a kvantitatív valós idejű PCR (qPCR) hatékony eszköz a génexpressziós szintek mérésére és a pontos, reprodukálható eredmények az adatok normalizálásához használt referenciagének helyes megválasztásától függenek.

A vizsgálatainkhoz szükséges levél- és termésminták begyűjtése a Debreceni Egyetem Böszörmény úti Campusának a Bemutató kertjéből történt 2021 július elejétől július végéig, öt időpontban. A mintavétel során a replikátumokat összegyűjtöttük és az RNS megőrzése érdekében helyszíni fagyasztást végeztünk folyékony nitrogénben, majd az elemzésig -80 °C-on voltak tárolva. A minták homogenizásása és az RNS izolálás folyékony nitrogén alatt történt, ezt követően az RNS minőségét elektroforézis után 1%-os agaróz gélen történő megjelenítéssel majd spektrofotometriával az A260/A280 és A260/A230 arányokat használva értékeltük. Előzetes tanulmányok alapján négy referenciagént választottunk ki vizsgálatainkhoz, amelyek tubulint (TUB), ubiquitint (UBI), aktint (ACT) és egy tioredoxin-szerű gént (TLG) kódolnak. Ebből a négy jelölt referenciagénből három (TUB, UBI és ACT) kielégítő eredményt adott, és kiválasztottuk további, downstream vizsgálatokhoz. A PCR-termékeket szekvenálás és a megfelelő génekhez történő szekvencia-illesztés is megerősítette. Második lépésben ellenőriztük és validáltuk az ismert molekuláris biológiai lutein bioszintézis markereket. A lutein bioszintézis génexpressziójához hét célgént és nyolc pár primert választottunk ki az vizsgálatokhoz (PSY, HYD, CYP97C, PDS, ZDS, LCYB, LCYE). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a csemegekukorica hibridek kiválasztásában a valós idejű PCR reakciók hatékonyak és alkalmasak a minták tömeges vizsgálatára.

Kulcsszavak: csemegekukorica, karotinoidok, lutein, génexpresszió, háztartási gén

Szerzői útmutató

Letöltés (PDF, 94 KB)

Publication Ethics

Publication Ethics and Malpractice Statement of Növénytermelés: The journal follows the CODE OF CONDUCT AND BEST PRACTICE GUIDELINES FOR JOURNAL EDITORS announced by the Committee on Publication Ethics.

Impresszum

Főszerkesztő:

Nagy János

Cím

Debreceni Egyetem
Mezőgazdaság-, Élelmiszertudományi és Környezetgazdálkodási Kar
4032 Debrecen, Böszörményi út 138.
4015 Debrecen, Pf. 36.

Telefon

(06 52) 508-310

Bővebben